Công thức tỷ lệ thắt của chúng tôi cho phép bạn tính toán khối lượng vector và insert tối ưu cần thiết cho một phản ứng tạo dòng.
Bạn chưa quen thuộc với các chủ đề và thuật ngữ này? Trong bài viết dưới đây, chúng tôi sẽ đề cập đến tất cả thông tin cơ bản mà bạn cần biết. Chúng tôi cũng sẽ nói về các phản ứng thắt vector và giải thích cách sử dụng công thức tỷ lệ mol tạo dòng và công thức thắt vector.
Công thức insert vector của chúng tôi hoạt động theo cả hai cách – chỉ cần nhập tất cả dữ liệu bạn có và tận hưởng kết quả của mình, bất kể bạn đang tìm kiếm điều gì .
Làm thế nào để tính tỷ lệ mol?
Công thức tỷ lệ mol thắt của chúng tôi sử dụng phương trình sau:
Khối lượng insert cần thiết = (Khối lượng vector × Chiều dài insert) / Chiều dài vector × Tỷ lệ mol
trong đó:
- Khối lượng insert cần thiết được tính bằng nanogram (ng);
- Khối lượng vector được tính bằng nanogram (ng);
- Chiều dài insert được tính bằng kilobase (kb);
- Chiều dài vector được tính bằng kilobase (kb); và
- Tỷ lệ mol là tỷ lệ insert/vector.
Phản ứng thắt
Mục đích của phản ứng thắt là tạo ra một plasmid tái tổ hợp. Để làm được điều đó, chúng ta sẽ cần gắn liên kết hai đầu dính – một từ khung xương DNA và một từ insert DNA. Quá trình kết nối này được xúc tác bởi một enzyme – DNA ligase T4 – ATP được sử dụng làm nguồn năng lượng.
Đầu dính là gì?
Hầu hết các enzyme hạn chế (còn gọi là enzyme “kéo”) cắt DNA một cách bất đối xứng. Quá trình này tạo ra các đầu không đều; sau đó, chúng ta có thể nối chúng với các đầu tương thích.
Vector là gì?
Vector là một phân tử sinh học đóng vai trò vật mang của một gen hoặc biểu hiện nhất định (ví dụ: plasmid). Chúng ta sử dụng nó để đưa vật liệu di truyền mong muốn vào một tế bào ngoại lai.
Vector trong sinh học có định nghĩa khác với vector toán học. Vì vậy, nếu bạn cần tìm hiểu về vector toán học, hãy tham khảo công thức chiếu vector của chúng tôi!
Vector = Khung xương + Insert
Khung xương là trình tự lớn hơn hỗ trợ vector.
Tỷ lệ mol insert/vector phụ thuộc vào yếu tố nào?
Tỷ lệ mol phụ thuộc vào kích thước của mỗi thành phần cũng như nồng độ của chúng. Trong hầu hết các trường hợp, khi kích thước vector lớn hơn kích thước insert, tỷ lệ 3:1 sẽ phù hợp.
Nếu cần, chúng tôi có một công thức nồng độ.
Tại sao chúng ta cần thắt?
- Chúng ta sử dụng thắt trong tạo dòng phân tử DNA. Vi khuẩn được cấy plasmid sẽ nhân lên đoạn DNA mong muốn của chúng ta:
- Chúng ta có thể sử dụng nó để sản xuất các chất (ví dụ: insulin);
- Chúng đóng vai trò là mô hình bệnh; và
- Chúng được thử nghiệm như một phần của liệu pháp gen.
- Thắt đóng vai trò thiết yếu trong quá trình sao chép DNA
- Thắt giúp duy trì sự sống của chúng ta; và
- Enzyme sửa chữa sợi DNA bị đứt gãy bằng cách thắt, bảo vệ chúng ta khỏi các đột biến không mong muốn và ảnh hưởng của chúng lên cơ thể.
